摘要:
目的:利用 CQ(chloroquine,CQ) 及雷帕霉素(rapamycin,RAPA) 诱导 Cal-27 细胞,探讨自噬在 口腔鳞癌上皮间充质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT) 中 的 作 用 和 机 制 。 方 法:应 用 TGF-β(transforminggrowthfactor,TGF-β) 诱导 Cal-27 细胞发生 EMT 。 同时应用 RAPA增强细胞自 噬水平,应用 CQ抑制细胞自噬水平 。应用细胞划痕实验分布检测诱导后细胞迁移能力的改变;Tran- swell 小室实验分别检测诱导后细胞的迁移能力 。Western blot检测诱导 3d 后 ZO-1,vimentin,FN1 等 EMT相关蛋白水平的变化;统计软件进行分析。结果:以 5ng/mLTGF-β诱导 Cal-27 细胞 3d,E- cadherin 明显下降,Vimentin 明显上升,说明建立 EMT模型成功 。与空白组相比较,以 5ng/mLTGF- β诱导 Cal-27 细胞 3d后,划痕愈合率明显上升(P<0.05),穿模细胞数明显增多(P <0.05);继而分别 以 100ng/mLRAPA和 100ng/mLCQ与 5ng/mLTGF-β共同诱导 Cal-27 细胞 3d,与 TGF-β组相比 较,RAPA共诱导组划痕愈合率明显下降(P <0.05),穿膜细胞数明显减少(P <0.05);与 TGF-β组相 比较,CQ共诱导组划痕愈合率明显升高(P<0.05),穿膜细胞数明显增多(P<0.05);与空白组相比较, 以 5ng/mLTGF-β诱导 Cal-27 细胞 3d后,FN1 AxVmentin表达量升高,ZO-1表达量降低;继而分别以 100ng/mLRAPA和100ng/mLCQ与 5ng/mLTGF-β共同诱导 Cal-27 细胞3d,与 TGF-β组相比较, RAPA共诱导组 FN1 AxVmentin表达量降低,ZO-1 表达量升 高;与 TGF-β组 相 比 较,CQ 共诱 导 组 FN1 AxVmentin表达量升高,ZO-1 表达量降低 。结论:TGF-β可以诱导 Cal-27 细胞建立 EMT 模型。 在 EMT模型中,促进自噬可以抑制 EMT转化,抑制自噬可以促进 EMT 转化。