Journal of Hainan Medical University(中文版)
2025年第31卷第7期文章目次
2025, 31(7):481-489.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20250210.001
摘要:
目的:利用体内和体外模型探究益智仁对糖尿病肾病上皮间充质转化的潜在治疗作用，并研究其作用机制。 方法:体内实验：db/m小鼠作为空白组，将db/db小鼠分为模型组、阳性药物对照组（恩格列净组）、益智仁低、中、高剂量组。通过HE染色观察肾脏组织病理改变，采用RT‑qPCR、Western blot检测肾脏组织中PFKFB3、E-cadherin、Col3α1和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平。体外实验：将HK‑2细胞分为空白组、模型组以及益智仁含药血清不同剂量组（低、中、高剂量组），同时设立恩格列净阳性对照组。经过24 h的药物干预后，首先通过划痕实验评估各组细胞的迁移能力，并据此确定最佳药物浓度。随后，采用RT‑qPCR和Western blot技术，检测HK‑2细胞中PFKFB3、E-cadherin、Col3α1和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平；利用免疫荧光技术进一步验证EMT中关键蛋白Col3α1的表达情况。 结果:体内实验：HE染色显示：与空白组相比，模型组肾小球体积增大、基底膜增厚，肾小管上皮细胞肿胀、管腔变窄，益智仁及恩格列净干预后各治疗组肾脏病理变化均有不同程度的减轻；在mRNA及蛋白表达水平中，与空白组相比，模型组E-cadherin表达水平显著下调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达水平则显著上调（P<0.05），与模型组比较，各给药组E-cadherin表达上调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达显著下调（P<0.05）。体外实验：与空白组相比，模型组细胞的迁移能力显著增强（P<0.05），与模型组比较，各含药血清组以及恩格列净组的HK‑2细胞迁移能力均有所降低（P<0.05），其中以10%含药血清组降低最为明显；在mRNA及蛋白表达水平中，与空白组相比，模型组E-cadherin表达水平显著下调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达水平则显著上调（P<0.05），与模型组比较，各给药组E-cadherin的表达明显上调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达显著下调（P<0.05）；与空白组比较，模型组Col3α1荧光表达水平升高，给予药物处理后Col3α1荧光表达水平下降。 结论:益智仁通过抑制PFKFB3介导的异常糖酵解改善糖尿病肾病上皮间充质转化。
目的:利用体内和体外模型探究益智仁对糖尿病肾病上皮间充质转化的潜在治疗作用，并研究其作用机制。 方法:体内实验：db/m小鼠作为空白组，将db/db小鼠分为模型组、阳性药物对照组（恩格列净组）、益智仁低、中、高剂量组。通过HE染色观察肾脏组织病理改变，采用RT‑qPCR、Western blot检测肾脏组织中PFKFB3、E-cadherin、Col3α1和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平。体外实验：将HK‑2细胞分为空白组、模型组以及益智仁含药血清不同剂量组（低、中、高剂量组），同时设立恩格列净阳性对照组。经过24 h的药物干预后，首先通过划痕实验评估各组细胞的迁移能力，并据此确定最佳药物浓度。随后，采用RT‑qPCR和Western blot技术，检测HK‑2细胞中PFKFB3、E-cadherin、Col3α1和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平；利用免疫荧光技术进一步验证EMT中关键蛋白Col3α1的表达情况。 结果:体内实验：HE染色显示：与空白组相比，模型组肾小球体积增大、基底膜增厚，肾小管上皮细胞肿胀、管腔变窄，益智仁及恩格列净干预后各治疗组肾脏病理变化均有不同程度的减轻；在mRNA及蛋白表达水平中，与空白组相比，模型组E-cadherin表达水平显著下调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达水平则显著上调（P<0.05），与模型组比较，各给药组E-cadherin表达上调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达显著下调（P<0.05）。体外实验：与空白组相比，模型组细胞的迁移能力显著增强（P<0.05），与模型组比较，各含药血清组以及恩格列净组的HK‑2细胞迁移能力均有所降低（P<0.05），其中以10%含药血清组降低最为明显；在mRNA及蛋白表达水平中，与空白组相比，模型组E-cadherin表达水平显著下调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达水平则显著上调（P<0.05），与模型组比较，各给药组E-cadherin的表达明显上调（P<0.05），PFKFB3、Col3α1、Vimentin的表达显著下调（P<0.05）；与空白组比较，模型组Col3α1荧光表达水平升高，给予药物处理后Col3α1荧光表达水平下降。 结论:益智仁通过抑制PFKFB3介导的异常糖酵解改善糖尿病肾病上皮间充质转化。
2025, 31(7):490-496.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241016.002
摘要:
目的:基于POF小鼠模型评价槲皮素对POF的保护作用及对铁死亡的调控机制。 方法:于2024年7~8月，将30只5周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常组，模型组及槲皮素组；除正常组外，其余2组腹腔注射环磷酰胺建立POF模型。槲皮素组给予槲皮素灌胃干预21 d，其余2组给予同量生理盐水。干预结束后取小鼠血清进行AMH、FSH、E2、T-SOD及CAT测定，取卵巢组织进行H&E染色、免疫组化分析、qRT-PCR检测。 结果:与正常组比较，模型组闭锁卵泡明显增多，AMH和E2水平明显降低（P<0.01），FSH水平明显升高（P<0.01），T-SOD活力和CAT活力明显降低（P<0.01），SLC7A11和GPX4基因及蛋白表达水平明显降低（P<0.05），ACSL4基因及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；与模型组相比，槲皮素组闭锁卵泡减少，卵巢病理组织可见成熟卵泡，AMH和E2水平显著升高（P<0.01），FSH水平显著降低（P<0.01）。与模型组相比，槲皮素组T-SOD活力和CAT活力明显升高（P<0.05）；SLC7A11表达升高，GPX4表达明显升高，ACSL4表达明显降低（P<0.05）。 结论:槲皮素通过激活SLC7A11/GPX4/ACSL4通路，有效抑制铁死亡过程，进而显著改善POF小鼠的卵巢功能和性激素水平。
目的:基于POF小鼠模型评价槲皮素对POF的保护作用及对铁死亡的调控机制。 方法:于2024年7~8月，将30只5周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常组，模型组及槲皮素组；除正常组外，其余2组腹腔注射环磷酰胺建立POF模型。槲皮素组给予槲皮素灌胃干预21 d，其余2组给予同量生理盐水。干预结束后取小鼠血清进行AMH、FSH、E2、T-SOD及CAT测定，取卵巢组织进行H&E染色、免疫组化分析、qRT-PCR检测。 结果:与正常组比较，模型组闭锁卵泡明显增多，AMH和E2水平明显降低（P<0.01），FSH水平明显升高（P<0.01），T-SOD活力和CAT活力明显降低（P<0.01），SLC7A11和GPX4基因及蛋白表达水平明显降低（P<0.05），ACSL4基因及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；与模型组相比，槲皮素组闭锁卵泡减少，卵巢病理组织可见成熟卵泡，AMH和E2水平显著升高（P<0.01），FSH水平显著降低（P<0.01）。与模型组相比，槲皮素组T-SOD活力和CAT活力明显升高（P<0.05）；SLC7A11表达升高，GPX4表达明显升高，ACSL4表达明显降低（P<0.05）。 结论:槲皮素通过激活SLC7A11/GPX4/ACSL4通路，有效抑制铁死亡过程，进而显著改善POF小鼠的卵巢功能和性激素水平。
2025, 31(7):497-505.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20240904.001
摘要:
目的:动态观察大鼠自然衰老进程中骨髓内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）衰老程度、细胞功能、线粒体结构和功能的变化及黄精的干预效果。 方法:将96只18月龄的大鼠按体质量随机分为老年组、黄精低剂量（1 g/kg）、中剂量（2 g/kg）、高剂量组（4 g/kg），每组24只；另设24只2月龄大鼠为青年组。各组每天灌胃1次，持续12周，在第4周、8周、12周每组各取8只大鼠麻醉处死，分离培养骨髓EPCs并鉴定；采用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度，采用CCK-8 法、Transwell小室、体外成血管试剂盒检测细胞的增殖、迁移和成小管功能；流式细胞仪检测胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；JC-1法检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，MMP）；化学发光法检测线粒体ATP含量；透射电镜观察线粒体形态结构。 结果:随周龄增加，老年组大鼠骨髓EPCs衰老程度逐渐加重，细胞增殖、迁移和成小管功能明显减退；胞内 ROS 水平升高且ATP含量及MMP降低（P<0.05）；电镜下可见线粒体固缩和大量自噬体。经黄精干预后，老年大鼠骨髓EPCs衰老程度减轻，细胞增殖、迁移和成小管功能有所改善；胞内ROS水平降低且ATP含量及MMP上升（P<0.05）；电镜下线粒体形态结构较为正常，可见少量自噬体。 结论:黄精可通过维护线粒体结构和功能的完整性来促进衰老大鼠骨髓EPCs的功能。
目的:动态观察大鼠自然衰老进程中骨髓内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）衰老程度、细胞功能、线粒体结构和功能的变化及黄精的干预效果。 方法:将96只18月龄的大鼠按体质量随机分为老年组、黄精低剂量（1 g/kg）、中剂量（2 g/kg）、高剂量组（4 g/kg），每组24只；另设24只2月龄大鼠为青年组。各组每天灌胃1次，持续12周，在第4周、8周、12周每组各取8只大鼠麻醉处死，分离培养骨髓EPCs并鉴定；采用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度，采用CCK-8 法、Transwell小室、体外成血管试剂盒检测细胞的增殖、迁移和成小管功能；流式细胞仪检测胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；JC-1法检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，MMP）；化学发光法检测线粒体ATP含量；透射电镜观察线粒体形态结构。 结果:随周龄增加，老年组大鼠骨髓EPCs衰老程度逐渐加重，细胞增殖、迁移和成小管功能明显减退；胞内 ROS 水平升高且ATP含量及MMP降低（P<0.05）；电镜下可见线粒体固缩和大量自噬体。经黄精干预后，老年大鼠骨髓EPCs衰老程度减轻，细胞增殖、迁移和成小管功能有所改善；胞内ROS水平降低且ATP含量及MMP上升（P<0.05）；电镜下线粒体形态结构较为正常，可见少量自噬体。 结论:黄精可通过维护线粒体结构和功能的完整性来促进衰老大鼠骨髓EPCs的功能。
2025, 31(7):506-512.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20240926.001
摘要:
目的:观察淫羊藿苷延缓自然衰老小鼠皮肤老化的作用和初步探讨其作用机制。 方法:将15月龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为衰老组、淫羊藿苷低剂量组（5 mg/kg）和淫羊藿高剂量组（20 mg/kg），每组10只。另取10只1月龄的雄性C57BL/6J小鼠作为青年对照组。饲养3个月后处死所有小鼠。H&E染色观察小鼠皮肤组织厚度；Masson染色观察胶原纤维的变化；免疫组化检测皮肤组织Ki67和p16表达；流式细胞术检测脾脏和淋巴结中CD4+FoxP3＋Treg百分比以及免疫组化检测皮肤组织Foxp3表达；蛋白免疫印迹法检测皮肤组织PI3K、AKT、m-TOR、P70S6K的蛋白表达水平。 结果:与青年组比较，衰老组小鼠皮肤的厚度变薄（P<0.01）；胶原纤维含量减少（P<0.01）；表皮Ki67的表达减少（P<0.01）；皮肤组织p16的表达增加（P<0.01）；脾脏和淋巴结组织内CD4+Foxp3+Treg百分比增加（P<0.01）；皮肤组织Foxp3的表达增加（P<0.01）；皮肤组织PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达没有明显变化，p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和P70S6K的蛋白表达增加（P<0.01）。与衰老组小鼠比较，淫羊藿苷给药组小鼠皮肤变厚（P<0.01）；胶原纤维含量增加（P<0.01）；表皮Ki67表达增加（P<0.01）；皮肤组织p16的表达减少（P<0.01）；脾脏和淋巴结组织内CD4+Foxp3+Treg百分比减少（P<0.05，P<0.01）；皮肤组织Foxp3表达减少（P<0.01）。皮肤组织PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达没有明显变化，p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和P70S6K的蛋白表达减少（P<0.05，P<0.01）。 结论:淫羊藿苷可以通过调控PI3K/AKT/m-TOR信号通路影响自然衰老小鼠Treg的表达进而延缓皮肤的衰老。
目的:观察淫羊藿苷延缓自然衰老小鼠皮肤老化的作用和初步探讨其作用机制。 方法:将15月龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为衰老组、淫羊藿苷低剂量组（5 mg/kg）和淫羊藿高剂量组（20 mg/kg），每组10只。另取10只1月龄的雄性C57BL/6J小鼠作为青年对照组。饲养3个月后处死所有小鼠。H&E染色观察小鼠皮肤组织厚度；Masson染色观察胶原纤维的变化；免疫组化检测皮肤组织Ki67和p16表达；流式细胞术检测脾脏和淋巴结中CD4+FoxP3＋Treg百分比以及免疫组化检测皮肤组织Foxp3表达；蛋白免疫印迹法检测皮肤组织PI3K、AKT、m-TOR、P70S6K的蛋白表达水平。 结果:与青年组比较，衰老组小鼠皮肤的厚度变薄（P<0.01）；胶原纤维含量减少（P<0.01）；表皮Ki67的表达减少（P<0.01）；皮肤组织p16的表达增加（P<0.01）；脾脏和淋巴结组织内CD4+Foxp3+Treg百分比增加（P<0.01）；皮肤组织Foxp3的表达增加（P<0.01）；皮肤组织PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达没有明显变化，p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和P70S6K的蛋白表达增加（P<0.01）。与衰老组小鼠比较，淫羊藿苷给药组小鼠皮肤变厚（P<0.01）；胶原纤维含量增加（P<0.01）；表皮Ki67表达增加（P<0.01）；皮肤组织p16的表达减少（P<0.01）；脾脏和淋巴结组织内CD4+Foxp3+Treg百分比减少（P<0.05，P<0.01）；皮肤组织Foxp3表达减少（P<0.01）。皮肤组织PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达没有明显变化，p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和P70S6K的蛋白表达减少（P<0.05，P<0.01）。 结论:淫羊藿苷可以通过调控PI3K/AKT/m-TOR信号通路影响自然衰老小鼠Treg的表达进而延缓皮肤的衰老。
2025, 31(7):513-521.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241014.001
摘要:
目的:基于STAT3信号通路研究益气活血开心汤对心肌梗死合并抑郁症大鼠模型大鼠心肌及海马的影响。 方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、益气活血开心汤低剂量（8.24 g/kg）组、益气活血开心汤高剂量（32.97 g/kg）组、西药（酒石酸美托洛尔20 mg/kg、盐酸氟西汀胶囊3.1 mg/kg）组，每组8只。除对照组外，其他各组采用采用结扎冠状动脉左前降支结合慢性不可预见性轻度应激方法制备大鼠心肌梗死合并抑郁模型，再按剂量各组灌胃给药。灌胃28 d后观察大鼠抑郁行为，观察各组大鼠心脏和海马组织病理变化，采用Western blot 检测心脏和海马STAT3、p-STAT3蛋白表达，免疫荧光检测p-STAT3大鼠心脏和海马定位表达情况，ELISA检测大鼠血清中CK-MB、cTnT、IL-17、IL-10的水平。 结果:行为学结果显示：与对照组相比，模型组大鼠水平得分和垂直得分显著减少（P<0.01），糖水消耗量明显降低（P<0.01）；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组水平得分和垂直得分均有不同程度增加（P<0.05），糖水偏好率均有不同程度升高（P<0.01）。病理染色结果显示：与对照组相比，模型组大鼠心肌细胞大量坏死，排列紊乱，可见大量胶原纤维、粘液沉积，海马神经细胞坏死明显，细胞数量少，核固缩，排列松散；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组心肌病理结构均有所改善，炎性浸润减少，纤维化情况得到明显改善，海马神经细胞数量相对较多，层次丰富，形态相对规则。ELISA和Western blot结果显示：与对照组相比，模型组大鼠血清IL-17、CK-MB和cTnT显著升高（P<0.01），IL-10显著下降（P<0.01），心脏和海马p-STAT3/STAT3蛋白表达量均显著升高（P<0.01）；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组IL-17、CK-MB和cTnT显著下降（P<0.01），IL-10显著升高（P<0.01），心脏和海马p-STAT3/STAT3蛋白表达量均显著下降（P<0.01）。免疫荧光结果显示：与对照组相比，模型组大鼠定位于心脏和海马的p-STAT3蛋白荧光强度显著增强；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组定位于心脏和海马的p-STAT3蛋白荧光强度显著减弱。 结论:益气活血开心汤可能通过抑制STAT3介导的炎症因子的表达而改善心肌纤维化情况和海马神经元的损伤治疗心肌梗死合并抑郁模型大鼠。
目的:基于STAT3信号通路研究益气活血开心汤对心肌梗死合并抑郁症大鼠模型大鼠心肌及海马的影响。 方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、益气活血开心汤低剂量（8.24 g/kg）组、益气活血开心汤高剂量（32.97 g/kg）组、西药（酒石酸美托洛尔20 mg/kg、盐酸氟西汀胶囊3.1 mg/kg）组，每组8只。除对照组外，其他各组采用采用结扎冠状动脉左前降支结合慢性不可预见性轻度应激方法制备大鼠心肌梗死合并抑郁模型，再按剂量各组灌胃给药。灌胃28 d后观察大鼠抑郁行为，观察各组大鼠心脏和海马组织病理变化，采用Western blot 检测心脏和海马STAT3、p-STAT3蛋白表达，免疫荧光检测p-STAT3大鼠心脏和海马定位表达情况，ELISA检测大鼠血清中CK-MB、cTnT、IL-17、IL-10的水平。 结果:行为学结果显示：与对照组相比，模型组大鼠水平得分和垂直得分显著减少（P<0.01），糖水消耗量明显降低（P<0.01）；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组水平得分和垂直得分均有不同程度增加（P<0.05），糖水偏好率均有不同程度升高（P<0.01）。病理染色结果显示：与对照组相比，模型组大鼠心肌细胞大量坏死，排列紊乱，可见大量胶原纤维、粘液沉积，海马神经细胞坏死明显，细胞数量少，核固缩，排列松散；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组心肌病理结构均有所改善，炎性浸润减少，纤维化情况得到明显改善，海马神经细胞数量相对较多，层次丰富，形态相对规则。ELISA和Western blot结果显示：与对照组相比，模型组大鼠血清IL-17、CK-MB和cTnT显著升高（P<0.01），IL-10显著下降（P<0.01），心脏和海马p-STAT3/STAT3蛋白表达量均显著升高（P<0.01）；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组IL-17、CK-MB和cTnT显著下降（P<0.01），IL-10显著升高（P<0.01），心脏和海马p-STAT3/STAT3蛋白表达量均显著下降（P<0.01）。免疫荧光结果显示：与对照组相比，模型组大鼠定位于心脏和海马的p-STAT3蛋白荧光强度显著增强；与模型组相比，益气活血开心汤低、高剂量组及西药组定位于心脏和海马的p-STAT3蛋白荧光强度显著减弱。 结论:益气活血开心汤可能通过抑制STAT3介导的炎症因子的表达而改善心肌纤维化情况和海马神经元的损伤治疗心肌梗死合并抑郁模型大鼠。
2025, 31(7):522-530.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20250311.001
摘要:
目的:探究微小RNA‑193b‑5p（miR‑193b‑5p）对宫颈癌的影响及作用机制。 方法:收集38例宫颈癌患者手术切除的宫颈癌肿瘤组织及同期38例来源于我院因良性病变切除全子宫患者的正常宫颈组织，RT‑qPCR检测两种组织中miR‑193b‑5p表达水平；将SiHa细胞分为对照组、mimics NC组、miR‑193b‑5p mimics组、inhibitors NC组、miR‑193b‑5p inhibitors组，进行相应转染后，RT‑qPCR检测各组细胞中miR‑193b‑5p表达水平，CCK‑8法、细胞划痕实验、Transwell小室法分别检测各组SiHa细胞的增殖活性、迁移、侵袭，细胞免疫荧光染色和Western Blot检测各组SiHa细胞中E‑钙黏蛋白（E‑cadherin）、N‑钙黏蛋白（N‑cadherin）、波形蛋白（Vimentin）等上皮‑间质转化（EMT）相关蛋白表达，生物信息学结合双荧光素酶报告基因实验预测和验证miR‑193b‑5p与白细胞分化抗原44号拼接变异体v6（CD44v6）的靶向调控关系。 结果:宫颈癌组织中miR‑193b‑5p相对表达量显著低于与正常宫颈组织（P<0.05）。与对照组、mimics NC组比较，miR‑193b‑5p mimics组SiHa细胞中miR‑193b‑5p相对表达量显著上调（P<0.05），细胞增殖活性、细胞划痕愈合率显著降低（P<0.05），细胞侵袭数目显著减少（P<0.05），E‑cadherin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著增加（P<0.05），N‑cadherin、Vimentin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著减少（P<0.05）；而与对照组、inhibitors NC组比较，miR‑193b‑5p inhibitors组SiHa细胞中miR‑193b‑5p相对表达量显著下调（P<0.05），细胞增殖活性、细胞划痕愈合率显著升高（P<0.05），细胞侵袭数目显著增加（P<0.05），E‑cadherin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著减少（P<0.05），N‑cadherin、Vimentin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著增加（P<0.05）。miR‑193b‑5p与CD44v6的3′‑非翻译区（3′‑UTR）存在结合位点，且与mimics NC组比较，将 miR‑193b‑5p mimics转染至SiHa细胞中显著抑制了CD44v6 野生型（WT）的相对荧光素酶活性（P<0.05）。 结论:miR‑193b‑5p在人宫颈癌肿瘤组织中表达降低，提高其表达能够抑制细胞增殖活性、迁移、侵袭及EMT等恶性行为，其分子机制可能与靶向抑制CD44v6表达有关。
目的:探究微小RNA‑193b‑5p（miR‑193b‑5p）对宫颈癌的影响及作用机制。 方法:收集38例宫颈癌患者手术切除的宫颈癌肿瘤组织及同期38例来源于我院因良性病变切除全子宫患者的正常宫颈组织，RT‑qPCR检测两种组织中miR‑193b‑5p表达水平；将SiHa细胞分为对照组、mimics NC组、miR‑193b‑5p mimics组、inhibitors NC组、miR‑193b‑5p inhibitors组，进行相应转染后，RT‑qPCR检测各组细胞中miR‑193b‑5p表达水平，CCK‑8法、细胞划痕实验、Transwell小室法分别检测各组SiHa细胞的增殖活性、迁移、侵袭，细胞免疫荧光染色和Western Blot检测各组SiHa细胞中E‑钙黏蛋白（E‑cadherin）、N‑钙黏蛋白（N‑cadherin）、波形蛋白（Vimentin）等上皮‑间质转化（EMT）相关蛋白表达，生物信息学结合双荧光素酶报告基因实验预测和验证miR‑193b‑5p与白细胞分化抗原44号拼接变异体v6（CD44v6）的靶向调控关系。 结果:宫颈癌组织中miR‑193b‑5p相对表达量显著低于与正常宫颈组织（P<0.05）。与对照组、mimics NC组比较，miR‑193b‑5p mimics组SiHa细胞中miR‑193b‑5p相对表达量显著上调（P<0.05），细胞增殖活性、细胞划痕愈合率显著降低（P<0.05），细胞侵袭数目显著减少（P<0.05），E‑cadherin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著增加（P<0.05），N‑cadherin、Vimentin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著减少（P<0.05）；而与对照组、inhibitors NC组比较，miR‑193b‑5p inhibitors组SiHa细胞中miR‑193b‑5p相对表达量显著下调（P<0.05），细胞增殖活性、细胞划痕愈合率显著升高（P<0.05），细胞侵袭数目显著增加（P<0.05），E‑cadherin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著减少（P<0.05），N‑cadherin、Vimentin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著增加（P<0.05）。miR‑193b‑5p与CD44v6的3′‑非翻译区（3′‑UTR）存在结合位点，且与mimics NC组比较，将 miR‑193b‑5p mimics转染至SiHa细胞中显著抑制了CD44v6 野生型（WT）的相对荧光素酶活性（P<0.05）。 结论:miR‑193b‑5p在人宫颈癌肿瘤组织中表达降低，提高其表达能够抑制细胞增殖活性、迁移、侵袭及EMT等恶性行为，其分子机制可能与靶向抑制CD44v6表达有关。
2025, 31(7):531-540.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241031.001
摘要:
目的:网络药理学和实验探究健脾活血方干预肝纤维化的作用靶点及机制。 方法:检索TCMSP获得健脾活血方各药物的活性成分；检索GeneCards、OMIM、TTD和 DrugBank数据库预测肝纤维化疾病靶点；活性成分与靶点交集预测健脾活血方治疗肝纤维化靶点。运用 Cytoscape 3.8.0 构建“药物‑成分‑靶点‑疾病”网络；运用 STRING 数据库以0.700为标准构建蛋白质‑蛋白质互作网络；运用R软件进行GO富集和KEGG通路富集分析。实验选取人星状细胞LX‑2培养，分为空白对照组、模型组［使用5ng转化生长因子‑β1（transforming growth factor ‑beta 1， TGF‑β1）诱导］和观察组（5 ng TGF‑β1诱导+健脾活血方干预），CCK‑8法检测中药干预细胞最佳浓度，免疫印迹法（Western Blot， WB）检测各组肝纤维化指标α‑平滑肌肌动蛋白（α‑smooth muscle actin， α‑SMA）、金属基质蛋白酶组织抑制因子‑1（tissue inhibitor of metalloproteinase‑1， Timp‑1）、结蛋白（Desmin）、胶原蛋白I（Collagen I）表达，WB检测各组AMPK和Hippo信号通路蛋白表达。 结果:筛选出114个主要活性成分，涉及146个基因靶点，其中主要活性成分包括木樨草素、槲皮素、β‑谷甾醇、当归素、白桦酸等；核心靶点基因包括TNF、IL‑6、PTGS2、TP53、MAPK1、JUN、ESR1等；富集到GO生物过程661个、细胞组分467个、分子功能115个，包括AMPK、TNF、Hippo 等 KEGG 信号通路164条。 CCK‑8结果表明0.625 mg/mL和1.25 mg/mL健脾活血方干预LX‑2细胞增殖最佳；WB结果表明相比空白对照组，模型组α‑SMA、Collagen I、Desmin、Timp‑1表达增高，相比模型组，观察组α‑SMA、Collagen I、Desmin、Timp‑1表达降低（P<0.05）；WB结果表明相比空白对照组，模型组p‑YAP、p‑TAZ和p‑AMPK表达降低，YAP、TAZ、AMPK表达升高，相比模型组，观察组p‑YAP、p‑TAZ和p‑AMPK表达增高，YAP、TAZ、AMPK表达降低（P<0.05）。 结论:健脾活血方治疗肝纤维化的机制与健脾活血方多成分多靶点干预AMPK和Hippo信号通路等多通路相关。
目的:网络药理学和实验探究健脾活血方干预肝纤维化的作用靶点及机制。 方法:检索TCMSP获得健脾活血方各药物的活性成分；检索GeneCards、OMIM、TTD和 DrugBank数据库预测肝纤维化疾病靶点；活性成分与靶点交集预测健脾活血方治疗肝纤维化靶点。运用 Cytoscape 3.8.0 构建“药物‑成分‑靶点‑疾病”网络；运用 STRING 数据库以0.700为标准构建蛋白质‑蛋白质互作网络；运用R软件进行GO富集和KEGG通路富集分析。实验选取人星状细胞LX‑2培养，分为空白对照组、模型组［使用5ng转化生长因子‑β1（transforming growth factor ‑beta 1， TGF‑β1）诱导］和观察组（5 ng TGF‑β1诱导+健脾活血方干预），CCK‑8法检测中药干预细胞最佳浓度，免疫印迹法（Western Blot， WB）检测各组肝纤维化指标α‑平滑肌肌动蛋白（α‑smooth muscle actin， α‑SMA）、金属基质蛋白酶组织抑制因子‑1（tissue inhibitor of metalloproteinase‑1， Timp‑1）、结蛋白（Desmin）、胶原蛋白I（Collagen I）表达，WB检测各组AMPK和Hippo信号通路蛋白表达。 结果:筛选出114个主要活性成分，涉及146个基因靶点，其中主要活性成分包括木樨草素、槲皮素、β‑谷甾醇、当归素、白桦酸等；核心靶点基因包括TNF、IL‑6、PTGS2、TP53、MAPK1、JUN、ESR1等；富集到GO生物过程661个、细胞组分467个、分子功能115个，包括AMPK、TNF、Hippo 等 KEGG 信号通路164条。 CCK‑8结果表明0.625 mg/mL和1.25 mg/mL健脾活血方干预LX‑2细胞增殖最佳；WB结果表明相比空白对照组，模型组α‑SMA、Collagen I、Desmin、Timp‑1表达增高，相比模型组，观察组α‑SMA、Collagen I、Desmin、Timp‑1表达降低（P<0.05）；WB结果表明相比空白对照组，模型组p‑YAP、p‑TAZ和p‑AMPK表达降低，YAP、TAZ、AMPK表达升高，相比模型组，观察组p‑YAP、p‑TAZ和p‑AMPK表达增高，YAP、TAZ、AMPK表达降低（P<0.05）。 结论:健脾活血方治疗肝纤维化的机制与健脾活血方多成分多靶点干预AMPK和Hippo信号通路等多通路相关。
2025, 31(7):541-551.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241219.001
摘要:
糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease， DKD）是一种进行性慢性糖尿病微血管并发症之一，为终末期肾病的主要原因。越来越多的证据表明，肾脏炎症在DKD发病中发挥至关重要的作用，其机制与炎症介质的过度激活相关。NLR家族pyrin域蛋白3（NLR family pyrin domain containing protein 3， NLRP3）炎症小体作为一种经典的炎症小体，可在细胞内组装成NLRP3多蛋白复合体。当机体接受内、外源性病原体或损伤时，NLRP3多蛋白复合体激发体内一系列炎症反应，促进炎症因子IL‑1β、IL‑18等释放，进而诱导DKD发生、发展。本文主要介绍了NLRP3炎症小体在NLRP3/Caspase‑1/IL‑1β通路介导的肾脏固有细胞（如肾小管上皮细胞、足细胞及系膜细胞等）异常及在DKD病理生理学反应中相关机制。除此之外，还讨论了天然黄酮类化合物作为可选择性靶向作用于肾脏内NLRP3炎性小体及其信号通路分子的候选药物在减缓炎症反应、减轻DKD症状方面的应用潜力。本文可为对DKD患者的科学管理治疗提供新思路。
糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease， DKD）是一种进行性慢性糖尿病微血管并发症之一，为终末期肾病的主要原因。越来越多的证据表明，肾脏炎症在DKD发病中发挥至关重要的作用，其机制与炎症介质的过度激活相关。NLR家族pyrin域蛋白3（NLR family pyrin domain containing protein 3， NLRP3）炎症小体作为一种经典的炎症小体，可在细胞内组装成NLRP3多蛋白复合体。当机体接受内、外源性病原体或损伤时，NLRP3多蛋白复合体激发体内一系列炎症反应，促进炎症因子IL‑1β、IL‑18等释放，进而诱导DKD发生、发展。本文主要介绍了NLRP3炎症小体在NLRP3/Caspase‑1/IL‑1β通路介导的肾脏固有细胞（如肾小管上皮细胞、足细胞及系膜细胞等）异常及在DKD病理生理学反应中相关机制。除此之外，还讨论了天然黄酮类化合物作为可选择性靶向作用于肾脏内NLRP3炎性小体及其信号通路分子的候选药物在减缓炎症反应、减轻DKD症状方面的应用潜力。本文可为对DKD患者的科学管理治疗提供新思路。
2025, 31(7):552-560.
DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20240927.001
摘要:
类风湿关节炎（RA）是一种严重损伤骨关节的免疫性疾病，NLRP3炎性小体在其发生发展过程中发挥了重要作用，NLRP3炎性小体的过度活化能够促进炎性反应，导致更为严重的关节损伤。近年研究报道表明，中药及其复方和活性成分能够通过干预NLRP3炎性小体发挥抗RA的作用。本文将对干预RA中NLRP3炎性小体活化的中药复方、单味中药和活性成分等研究进行综述，并阐明相关作用机制，从而为以NLRP3炎性小体作为靶向研究中药治疗RA提供新的思路。
类风湿关节炎（RA）是一种严重损伤骨关节的免疫性疾病，NLRP3炎性小体在其发生发展过程中发挥了重要作用，NLRP3炎性小体的过度活化能够促进炎性反应，导致更为严重的关节损伤。近年研究报道表明，中药及其复方和活性成分能够通过干预NLRP3炎性小体发挥抗RA的作用。本文将对干预RA中NLRP3炎性小体活化的中药复方、单味中药和活性成分等研究进行综述，并阐明相关作用机制，从而为以NLRP3炎性小体作为靶向研究中药治疗RA提供新的思路。
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